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LB培養(yǎng)基的分類與倒板
  • 發(fā)布日期:2022-07-12      瀏覽次數(shù):2729
    • LB培養(yǎng)基是一種培養(yǎng)基的名稱,生化分子實驗中一般用該培養(yǎng)基來預培養(yǎng)菌種,使菌種成倍擴增,達到使用要求。也可用于培養(yǎng)基因工程受體菌(大腸桿菌)??煞譃?/span>液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。LB一般被解釋為Luria-Bertani培養(yǎng)基,然而根據(jù)其發(fā)明人貝爾塔尼(Giuseppe Bertani)的說法,這個名字來源于英語的lysogeny broth,即溶菌肉湯。

      肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種廣泛用于培養(yǎng)細菌的培養(yǎng)基。而LB培養(yǎng)基則是一種近年來用于培養(yǎng)基因工程受體菌(大腸桿菌)的常用培養(yǎng)基。兩者都屬于半合成培養(yǎng)基。肉膏蛋白胨的培養(yǎng)基主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。而LB培養(yǎng)基的主要成分是胰蛋白胨、酵母提取物和NaCl。高氏合成一號培養(yǎng)基是一種用于培養(yǎng)放線菌的合成培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中的可溶性淀粉作為碳源和能源。

      分類

      液態(tài)培養(yǎng)基

      根據(jù)《分子克隆實驗指南》(J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著)配制每升培養(yǎng)基,應該在950 ml去離子水中加入:

      胰蛋白胨10g

      酵母提取物5g

      NaCl 10g

      搖動容器直至溶質(zhì)溶解.用5mol/LNaOH調(diào)pH至7.0.用去離子水定容至1L.在15psi高壓下蒸汽滅菌21min.

      培養(yǎng)的菌種一般是經(jīng)過改造的無法在外界環(huán)境單獨存活和擴增的工程菌.通過培養(yǎng)工程菌,我們可以表達大量的外源蛋白,也可以拿到帶有外源基因的質(zhì)粒,工程菌的有效擴增是生化分子實驗的基礎.

      LB培養(yǎng)基的配方如下:

      胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L

      酵母提取物(Yeast extract) 5g/L

      氯化鈉(NaCl) 10g/L

      另外根據(jù)經(jīng)驗值用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH,使其達到7.4(該pH適合使用*的原核表達菌種E.coli的生長)

      固態(tài)培養(yǎng)基

      LB固體培養(yǎng)基1L和液體一樣,加15g~20g瓊脂粉,一定要在溫度降下之前加好抗生素,并且倒好板。

      倒板

      1.配制:100mlLB培養(yǎng)基加入1~1.5g瓊脂粉

      2.抗生素的加入:高壓滅菌后,將融化的LB固體培養(yǎng)基置于55℃的水浴中,待培養(yǎng)基溫度降到55℃時(手可觸摸)加入抗生素,以免溫度過高導致抗生素失效,并充分搖勻。

      3.倒板:一般15ml-20ml倒1個板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后,打開蓋子,在紫外下照10-15分鐘。

      4.保存:用封口膠封邊,并倒置放于4℃保存,一個月內(nèi)使用。

      ph值需要控制在7.4



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