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Trizol提取RNA的詳細步驟
發(fā)布日期：2022-09-21 瀏覽次數(shù)：973
1、在提取組織RNA時，每50～100mg組織用1ml Trizol試劑對組織進行裂解；提取細胞RNA時，先離心沉淀細胞，每5-10╳106個細胞加1ml Trizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細胞。
2、將組織或細胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中,在室溫15~30C下放置5分鐘；在EP管中，按照每1mlTRIZOL加0.2ml氯/仿的量加入氯/仿，蓋上EP管蓋子，在手中用力震蕩15秒，在室溫下（15℃～30℃）放置2～3分鐘后，12000g（2℃～8℃）離心15分鐘。
3、取上層水相置于新EP管中,按照每1mlTRIZOL加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15℃～30℃）放置10分鐘,12000g（2℃～8℃）離心10分鐘。
4、按照每1mlTRIZOL加1ml 75%乙醇進行洗滌，渦旋混合，7500g（2℃～8℃）離心5分鐘，棄上清；讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥；用Rnase-freewater溶解RNA沉淀。
Ps:在收集到生物材料之后，最好馬上進行RNA制備工作。若需暫時儲存，則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后，儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時，將儲存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細胞，不可以先行解凍，以避免RNase的作用。
