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培養(yǎng)基配置與儲(chǔ)存

發(fā)布日期：2023-04-18 瀏覽次數(shù)：904

實(shí)驗(yàn)材料

基礎(chǔ)培養(yǎng)基（液體或干粉）；PET/PETG方形試劑瓶；血清（常規(guī)為FBS/NBS）；補(bǔ)充劑；移液槍；電動(dòng)移液槍；15mL、50mL無菌離心管；滅菌超純水；盒裝無菌吸頭；血清移液管；超凈工作臺(tái)；雙抗（青鏈霉素混合液）；杯式濾器(0.22μm PES膜)；針式濾器 (0.22μm PES膜)

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

血清準(zhǔn)備：

配置培養(yǎng)基前一天，將所需血清從-20℃冰庫取出，放置入2-8℃冰箱緩慢解凍儲(chǔ)存，使用前37℃水浴加熱。

培養(yǎng)基準(zhǔn)備：

液體基礎(chǔ)培養(yǎng)基使用前37℃水浴加熱。

實(shí)驗(yàn)流程

基礎(chǔ)培養(yǎng)基配置（干粉）：

根據(jù)配置體積，選擇合適的滅菌后容器，在容器中倒入約90%體積的超純水，將培養(yǎng)基干粉全部倒入該容器中，用少量超純水將袋內(nèi)殘留粉末洗出。

攪拌30min使所有成分溶解，待溶液澄清后，根據(jù)說明書加入適當(dāng)量的碳酸氫鈉（分析純），繼續(xù)攪拌5-10min至溶解，隨后超純水定容并調(diào)節(jié)PH值。(過濾會(huì)使培養(yǎng)基PH值稍微偏高，所以用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)整PH值至7.20-7.30）

使用0.22μm杯式濾器或0.22μm針式濾器過濾除菌，并按照日常使用規(guī)格分裝入PET/PETG方形試劑瓶中，2-8℃條件下避光保存?zhèn)溆谩?/section>

培養(yǎng)基配置：

若含有補(bǔ)充劑，用1000μL無菌吸頭取出適量預(yù)熱完成的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，注入補(bǔ)充劑西林瓶中，將其充分溶解，再將含有補(bǔ)充劑的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。

接著按照血清使用比例，用血清移液管吸取適量預(yù)熱完成的血清，注入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，蓋上瓶蓋充分混勻。

雙抗加入：

除了特殊篩選系統(tǒng)外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不添加任何抗生素。若為防止細(xì)菌、真菌污染，或懷疑細(xì)胞污染需要清除細(xì)菌，可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液，其培養(yǎng)基中的終濃度為青霉素100U/ml，鏈霉素為100ug/ml。

培養(yǎng)基保存：

將配置后的培養(yǎng)基2-8℃條件下，避光保存?zhèn)溆茫换虬凑帐褂眯枨蠓盅b入對(duì)應(yīng)規(guī)格的PET/PETG方形試劑瓶中。隔夜或1-2天后觀察培養(yǎng)基，溶液澄清通透且無染菌，方可使用。

使用多余的血清，按照剩余量，可分裝入15mL/50mL的無菌離心管中（防止血清凍存后膨脹泄露問題，離心管工作體積建議為80%），亦可分裝入合適規(guī)格的PET/PETG方形試劑瓶中，并用封口膜封口，-20℃條件下避光保存。

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