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如何鋪出均勻的細(xì)胞培養(yǎng)板?
  • 發(fā)布日期:2023-11-20      瀏覽次數(shù):679
    • 細(xì)胞居中和細(xì)胞邊緣化

      從經(jīng)濟(jì)和高效的角度來說,需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同規(guī)格的培養(yǎng)板。如在進(jìn)行藥物對(duì)待測細(xì)胞半抑制率(IC50)測試時(shí),通常使用96孔板,一方面可以設(shè)置濃度梯度;另外還可一次性測多個(gè)藥物,減少實(shí)驗(yàn)誤差。

       

      收集細(xì)胞要混勻

      消化后的細(xì)胞一定要充分混勻,要把聚在一起的細(xì)胞團(tuán)充分地吹打開,最好是單個(gè)的狀態(tài),但同時(shí)又不能損傷細(xì)胞,可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究,一般用1000 rpm/min即可。離心力太大細(xì)胞容易抱團(tuán),然后懸浮離心后的細(xì)胞團(tuán)時(shí),先不要把所有液體都加進(jìn),一般先加2mL液體,然后用1mL移液器輕輕將細(xì)胞吹起,細(xì)胞要像云霧一樣散開,這樣易于形成單細(xì)胞。

       

      鋪6孔板,12孔板或24孔板,先在每個(gè)孔里面加1mL的培養(yǎng)基,晃動(dòng)使之鋪勻整個(gè)孔底,然后加入1 mL的細(xì)胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入,這樣細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底,細(xì)胞分散較均勻,注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下。這里又有一個(gè)竅門,放在顯微鏡的載物臺(tái)上面。因?yàn)轱@微鏡的載物臺(tái)是水平校正過的,比什么桌面、超凈臺(tái)什么的要平多了。在載物臺(tái)上放置20-30分鐘,細(xì)胞不差這一會(huì)溫度和二氧化碳的,等細(xì)胞貼壁了,輕輕移入到孵箱中。
      鋪96孔板,我每孔是加100微升細(xì)胞懸液,加完半邊板48孔后,將剩下的未加的細(xì)胞懸液再混一下,再繼續(xù)加剩余的半邊板子,都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度,敲三次即可,太大力或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆。


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