蛋白Marker主要分為未預(yù)染蛋白Marker和預(yù)染蛋白Marker兩種,另外還有一些其他類型的蛋白Marker:如顯影蛋白Marker等。
未預(yù)染蛋白Marker:
是幾種已知分子量并純化好的蛋白質(zhì)預(yù)混液。
非預(yù)染蛋白Marker在電泳過程中看不到,電泳結(jié)束后經(jīng)過蛋白染色后才能起指示作用,無法在實驗過程中起預(yù)示作用。
但是由于蛋白沒有附帶染料分子或者是標記分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以最準確。
預(yù)染蛋白Marker:
是純化好的幾種蛋白,通過與染料共價耦聯(lián)后混合在一起,在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時可以直接觀察到的一種蛋白Marker。
預(yù)染蛋白Marker又可分為單色預(yù)染和多色預(yù)染。
Marker條帶越多參考價值越大,同時也越難區(qū)分,若用不同顏色則容易辨認;
單色的Marker通常利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小。
預(yù)染蛋白Marker在電泳過程可以起到預(yù)示作用,當觀察目標蛋白大小位置進入最佳分辨區(qū)時,停止電泳,以得到最佳分辨效果。
轉(zhuǎn)膜過程可以監(jiān)測轉(zhuǎn)膜效率,同時可以在膜上標記蛋白分子量。
但是,預(yù)染蛋白Marker與染料共價偶聯(lián),在不同的緩沖條件下,電泳遷移特性可能會發(fā)生某些變化,導(dǎo)致一些偏差。
也就是說,預(yù)染蛋白Marker條帶代表的是相對大小,而不是絕對大小。
顯影蛋白Marker:
顯影蛋白Marker,蛋白條帶中含有IgG結(jié)合位點,IgG結(jié)合位點會結(jié)合用于檢測靶蛋白的一抗或二抗,使得蛋白Marker在印跡膜上可與目的條帶一同呈現(xiàn)。
通常會有兩個預(yù)染條帶,便于動態(tài)觀察蛋白質(zhì)電泳狀態(tài),判斷轉(zhuǎn)膜效果和方向;
結(jié)合抗體后經(jīng)化學(xué)發(fā)光檢測可顯示多個條帶。