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如何檢定TCB血清的質(zhì)量?
  • 發(fā)布日期:2022-11-27      瀏覽次數(shù):571
    •   1、如何儲(chǔ)存和解凍TCB血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
        將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
        長時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,并避免反復(fù)凍融。
        我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
        2、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?
        沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,沉淀會(huì)自然消失。
        3、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
        按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:
       ?。?)解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
       ?。?)血清分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
        (3)勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
       ?。?)勿將TCB血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
       ?。?)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
        (6)若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。
        4、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
        一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。
        5、為什么要熱滅活血清?
        加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。
        6、有必要做熱滅活嗎?
        實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是小黑點(diǎn),常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。
        若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量!
        在此,我們解析血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):
        1、牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。
        2、證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。
        3、有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。
        4、無細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細(xì)菌噬菌體污染。
        5、對(duì)細(xì)胞有良好的支持繁殖作用。
        6、TCB血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。
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