熱滅活目的是祛除血清中補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。
對照瓶內(nèi)插入2—3支經(jīng)挑選的溫度計(jì)(保證測試溫度的準(zhǔn)確性),放入水浴箱中,接通電源,調(diào)節(jié)溫度控制鈕,使水浴箱溫度所示溫度保持在56℃。
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血清瓶與帶溫度計(jì)的對照瓶一齊放入水浴箱中,待溫度計(jì)所示溫度上升至56℃時, 定時30分鐘。
⑤大瓶血清滅活后,進(jìn)行分裝。
⑥保存。
分裝后,抽樣做無菌試驗(yàn),-20~-70℃保存。
為什么要熱滅活胎牛血清?
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時,推薦試用熱滅活胎牛血清。
但是,其實(shí),有必要做熱滅活嗎?實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活胎牛血清,對大多數(shù)細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的胎牛血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥颂ヅQ宓馁|(zhì)量,造成細(xì)胞生長速率降低。而經(jīng)過熱處理的胎牛血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是小黑點(diǎn)?常常會讓研究者誤以為是胎牛血清遭受污染,而把胎牛血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。